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離心機---差速離心簡介

更新時間:2019-08-09  |  點擊率:10363

      差速離心

    差速離心法是利用樣品中各種組分的沉降系數(shù)不同而進行分離的方法,又稱差分離心或差級離心。通常兩個組分的沉降系數(shù)差在10倍以上時可以用此法分離。在差速離心中細胞器沉降的順序依次為:核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、之后為核蛋白體。

     差速離心是指低速與高速離心交替進行,使各種沉降系數(shù)不同的顆粒先后沉淀下來,達到分離的目的。沉降系數(shù)差別在一個或幾個數(shù)量級的顆粒,可以用此法分離。樣品離心時,在同一離心條件下,沉降速度不同,通過不斷增加相對離心力,使一個非均勻混合液內的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。操作過程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開,然后將上清液加高轉速離心,分離出第二部分沉淀,如此往復加高轉速,逐級分離出所需要的物質。差速離心方法較簡單,但分辨率不高,沉淀系數(shù)在同一個數(shù)量級內的各種粒子不容易分開,常用于其他分離手段之前的粗制品提取。

    在差速離心中細胞器沉降的順序依次為:核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、之后為核蛋白體。由于各種細胞器在大小和密度上相互重疊,而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中,一般重復23次效果會好一些。差速離心只用于分離大小懸殊的細胞,更多用于分離細胞器。通過差速離心可將細胞器初步分離,常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。

差速離心 - 優(yōu)點

    差速離心法的優(yōu)點是樣品的處理量較大,可用于大量樣品的初分離。其缺點是分離復雜樣品和要求分離純度較高時,離心次數(shù)多,操作繁雜。由于沉淀的多次清洗、溶解、再沉淀,容易引起中間損失,所以離心分辨力差。實際分離時由于離心時的對流、擴散和收取沉淀時的污染,對于一些沉降系數(shù)相差不大的組分無法進行*的分離提純。產品的純度和回收率都達不到上述理論值。因此差速離心法主要用于大量樣品的初步分離提純。

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